肠道部分缺血再灌注损伤动物模型的复制

曹卫红 胡森 孙丹 白玉梅 冀建超   盛志勇*

基金项目：全军“十五”医药卫生科研基金资助项目（01L081）

*通讯作者：盛志勇 院士解放军三О四医院全军烧伤研究所，北京，100037

摘要：目的 复制肠道部分缺血再灌注（I/R）损伤动物模型。方法 90只大耳白兔随机分为失血性休克组、肠部分I/R组、假手术对照组、正常对照组。首先复制失血性休克动物模型，采用激光多普勒血流仪确定肠系膜上动脉（SMA）血流量的变化；其次，自行设计血流阻断器并测试其稳定性；最后，依据休克模型SMA血流量的变化，用自制的血流阻断器部分阻断SMA，复制肠道部分I/R损伤动物模型，同时观察多个脏器病理形态学和功能改变。结果失血性休克后SMA血流量明显减少；SMA血流部分阻断50%，维持4小时，可造成肠道I/R损伤及多器官功能障碍。结论 用自行设计的血流阻断器部分阻断SMA可成功复制出肠道部分I/R损伤动物模型。关键词：休克；肠；部分缺血再灌注损伤；动物模型 The replication of an animal model of intestine partially ischemia and reperfusion injury

CAO Weihong , HU Sen, SUN Dan, et al. Burn Institute, 304th Hospital of PLA, Beijing 100037,China) Abstract Objective: To replicate an animal model of intestine partially ischemia and reperfusion injury. Methods: ninety white rabbits were randomized into 4 groups: hemorrhagic shock, ischemia and reperfusion(I/R), sham operation, and normal control. The hemorrhagic shock models were replicated, and the changes of superior mesenteric artery(SMA) blood flow  were measured with laser Doppler blood flow meter. According to the changes of SMA blood flow during hemorrhagic shock the SMA were partially blocked with self –designed blocker in order to replicate the intestine partially I/R models, and the changes of functions and pathology of heart, liver and kidney were observed. Results: The SMA blood flow reduced dramatically in hemorrhagic shock models. The SMA blood flow was blocked to 50% lasting for 4 hours can cause multiple organs I/R injury and dysfunction. Conclusions: To block the SMA partially with self-designed blocker can successfully replicate the intestine partially ischemia and reperfusion models.    Key words: shock; intestine; ischemia and reperfusion; animal model;

  肠道I/R是严重创伤、烧伤休克后常见的病理生理过程, 肠道I/R不仅可引起肠道局部组织损伤, 肠内细菌和毒素移位，而且可致肠源性炎症介质和细胞因子释放，引起全身性炎症反应，甚至多器官功能障碍[1、2]。既往有关肠道I/R损伤的研究，主要采用短期完全阻断动物SMA的实验模型[3]。研究表明，虽然严重创伤、休克后肠道血流明显减少，但并非完全停止；因此，建立符合临床实际的肠道部分I/R损伤动物模型，有利于进一步阐明肠道在创伤和休克后病理生理过程中的作用。为此，我们依据失血性休克SMA血流量的变化复制肠道部分I/R损伤动物模型，以期为研究肠道部分I/R损伤提供一种可靠的实验动物模型。

材料与方法

1 动物选择及处理：清洁级雄性大耳白兔90只,体重2±0.2Kg（北大医学部提供）。动物在本院动物室适应1～2周后进行实验。随机分为：失血性休克组（5只）、肠部分I/R损伤组（55只）、假手术组（25只）、正常对照组（5只）。术前24h禁食，12h禁水。

2 失血性休克动物模型制作：用Wigger’s法复制失血性休克模型，用Periflux 4001型激光多普勒血流仪测定SMA血流量。3%戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉麻醉后, 固定动物，建立输液

通道，输液速度20ml/h；腹部、右上下肢内侧备皮，碘伏消毒，铺无菌洞巾；右股动脉插管后连接CARDIOMAX Ⅱ型小动物血流动力学监测仪监测平均动脉压（MAP）；右侧肱动脉插管，连接三通；沿腹白线剪开腹壁,外置肠管并覆盖温盐水纱布，外用烤灯加温，定时于纱布上滴加温盐水，保持肠管湿润；暴露SMA后5分钟测定SMA血流量；右侧肱动脉缓慢抽血，当MAP在100、80、60、40、30mmHg稳定5分钟后，再次测定SMA血流量。

3 动脉血流阻断器的制作

3.1制作动脉血流阻断器：用旋转式丝线阻断法设计阻断器，阻断器组成：

三通、Y形塑料双通管（内径1mm）、肝素帽、尼龙线。如图：

3.2阻断器稳定性测定：大耳白兔5只，手术同上，游离SMA约0.5㎝，将尼龙线穿过动脉并与阻断器连接，按一定比例阻断SMA，测量SMA血流量1次/1h。

4 肠部分I/R损伤动物模型制作

4.1制作方法：

麻醉、开腹基本同休克组，暴露、游离SMA约0.5㎝，将尼龙线穿过动脉并与阻断器连接，测量并调整血流阻断量后，肠管纳入腹腔，覆盖湿盐水纱布，外用烤灯加温，并保持肠管湿润；去除阻断器后，依据MAP变化调整输液速度、输液量。待MAP恢复至伤前值的80%，稳定4h后，关腹。术中以安定(2mg/kg)防止动物躁动。

4.2   液体复苏方案[4]：

①液体种类：复苏液体为0.9%氯化钠和706代血浆，比例1：1。

②输液速度：松夹后40分钟内以20ml/10min的速度交替输入以上两种液体约50-100ml，MAP稳定后维持输液速度20ml/h，至复苏后6h。

③复苏成功标准：40分钟内调整MAP至伤前值的80%以上，稳定6h。

④补足液量后MAP无好转：快速静推盐酸多巴胺20mg后，将200mg多巴胺加入100ml盐水中，快速静滴（50ml/h），待Bp升至伤前值的80%后，逐渐下调输液速度至20ml/h, 维持1小时后，以0.9%氯化钠替换（20ml/h），如MAP持续下降则复苏失败。

5 器官功能障碍的评价：SMA阻断前及阻断后2h、6h、1d、2d、3d抽血，用生化自动分析仪测定肌酸激酶同工酶（CK-MB）、谷丙转氨酶（GPT）及血肌苷（Cr）的变化。器官功能障碍的诊断参见文献标准[4]。

6 统计学方法

实验数据分析采用t检验、方差分析，结果以均数±标准差（X±S）表示。